验证策略概述
ABPP-WB 和 CETSA-WB 是两种互补的靶点验证方法，通过 Western Blot 检测手段对 ABPP 或 CETSA 实验结果进行独立验证，确保靶点鉴定的可靠性。
ABPP-WB 验证
- 使用带报告基团的 ABPP 探针标记细胞/组织样品
- SDS-PAGE 电泳分离后转膜，通过抗报告基团抗体（如抗生物素-HRP）检测
- 可直观比较不同处理组之间的靶标蛋白标记强度差异
- 适用于已知分子量的靶标蛋白快速验证
CETSA-WB 验证
- 梯度加热处理后的样品离心分离可溶性与沉淀组分
- Western Blot 检测不同温度下可溶性靶标蛋白的含量
- 绘制熔解曲线计算 Tm 值偏移（ΔTm）
- ΔTm > 2 ℃ 判定为阳性结合结果
组合验证流程
推荐采用 "ABPP 靶点发现 → ABPP-WB 初步验证 → CETSA-WB 细胞内验证" 的级联验证策略，最大程度降低假阳性风险。